因气性坏疽一旦发生，病情凶险，需尽快作出诊断。微生物学检查法包括直接涂片镜检和分离培养与动物试验。

1、直接涂片镜检：这是极有价值的快速诊断法。从深部创口取材涂片，革兰染色，镜检见有革兰阳性大杆菌，白细胞甚少且形态不典型（因毒素作用，白细胞无趋化反应），并伴有其他杂菌等三个特点即可报告初步结果。早期诊断能避免患者最终截肢或死亡。

2、分离培养与动物试验：取坏死组织制成悬液接种血平板或庖肉培养基，厌氧培养，观察生长情况，取培养物涂片镜检，并用生化反应鉴定。

必要时可取细菌培养液0.5-1ml静脉注射小鼠，10分钟后处死，置37℃经5～8小时观察，如动物躯体膨胀，取肝或腹腔渗出液涂片镜检并分离培养。

疑为产气荚膜梭菌引起的食物中毒，在发病后一日内可取剩余食物或粪便作细菌学检查。若检出大于103个病菌/克食品或106个病菌/克粪便可确诊。