1.3 兔抗CM-LC血清的制备 取提纯的CM-LC1ml(1g/L)，按常规方法免疫动物制备抗CM-LC血清，并采用琼脂双扩法测定血清特异性抗体的效价。
1.2 CM-LC的纯度及相对分子质量(Mr)鉴定取10μl(含100μg)CM(含HC和LC)、10μl(含12μg)的CD－LC及10μl(含10μg)的标准蛋白，用不连续缓冲系统的SDSPAGE，鉴定CM-LC的纯度和Mr。
透析后的上清液用80％饱和硫酸铵沉淀。将沉淀溶于含0.5mol/LKCl，0.05mol/LTris缓冲液中，用0.1mol/L柠檬酸调pH至5.3，轻轻搅拌1.5h，再以26000×g离心30min，并重复数次。取沉淀物(主要含LC2)用0.02mol/LNa2HPO4缓冲液，0.05mol/LNaCl,0.001mol/L巯基乙醇及0.1mmol/LPMSF(pH7.5)溶解，于－20℃保存备用。
1 材料和方法1.1 CM-LC的制备 采用改良的Schler法〔1〕，于0℃～4℃条件下进行。具体步骤如下：取即时处死的正常狗心室肌，除去脂肪、血管和瓣膜，用冷生理盐水洗净后，切成小块，称取70g用组织粉碎机磨碎。加入0.001mol/L，pH7.6的Tris-HCl缓冲液洗涤并搅拌数分钟后，以3000×g离心10min。如此反复5～7次至血水接近透明为止。弃去上清液，将心肌组织以2.5倍体积含Mg2＋,K＋及巯基乙醇的磷酸缓冲液抽提10min，离心(3500×g)10min。取上清液，缓慢滴加9倍于上清液的冷蒸馏水，搅拌过液。次日，再以3500×g离心10min，弃上清，所得沉淀物即为粗制的CM。将CM用含0.5mol/LKCl及，0.001mol/LTris缓冲液(pH7.0)溶解后，加入含尿素、甘氨酸、EDTA、巯基乙醇及苯甲基磺酰氟化物(phenylmethyl sulfonylfluoride,PMSF)的轻、重链裂解液，强力搅拌6h。加入10倍体积的冷蒸馏水,用1mol/LNaH2PO4调pH至6.6，以14000×g离心15min，弃去沉淀(重链)。上清液用大量冷蒸馏水充分透析，以除去尿素。
心肌肌凝蛋白(CM)是心肌特有的收缩蛋白。当急性心肌梗塞(AMI)造成心肌细胞缺血坏死时，CM可分解成轻链(LC)和重链(HC)两部分。HC存留于心肌内，LC释放入血，使血清CM-LC水平升高，故可用于AMI的临床诊断。为此，作者采用改良后的Schler方法，对CM-LC进行了分离提纯与鉴定，以为其临床应用创造条件。
心肌肌凝蛋白是什么？想了解一下心肌肌凝蛋白。
