诊断梅毒必须结合病史、体检和化验结果综合考虑，必要时，还需进行跟踪观察，家属调查或采用试验治疗等辅助方法。
 
1、病史 要询问患者有无婚外性接触或不洁性交史性乱距就诊有多长时间，性伴有无性病等；病人在生殖器等部位是否有过无痛痒的皮肤黏膜皮疹或破溃，有无二期或三期梅毒的表现，有无其他性病的表现；病人无婚外性接触史时，应询问结婚的次数与时间，配偶有无梅毒或其他性病；怀疑为胎传梅毒时，应询问其父母的性病史，其母的分娩史、患儿有无早期或晚期胎传梅毒的症状与体征；怀疑为潜伏梅毒时，应询问有无引起生物学梅毒血清假阳性的疾病；如以前曾有过类似梅毒状的疾患，应询问用过什么药治疗，是否规律足量，有无药物过敏史等。
 
2、体格检查 与一般内科，皮肤科疾病的检查相同。对感染期比较短的病人，重点检查全身皮肤黏膜，特别是生殖器、肛门、口腔等部位，女性病人要检查子宫颈。对感染期较长的病人，除皮肤和黏膜以外，还要检查心血管系统及神经系统有无异常。
 
3、实验室检验

（1）组织及体液中梅毒螺旋体检验 从早期皮肤黏膜的皮疹和破溃处取材作涂片，用暗视野显微镜观察可见梅毒螺旋体。

（2）梅毒血清试验 一般对疑似梅毒患者均需作血清试验，可先做非螺旋体抗原试验，必要时再做梅毒螺旋体抗原试验。常用的非梅毒螺旋体抗原血清试验有血清不加热的反应素玻片试验（USR）、性病研究实验室玻片试验（VDRL）和快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）。常用的梅毒螺旋体抗原血清试验有荧光螺旋体抗血清试验（FTA—ABS）和梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）。

（3）脑脊液检查 包括脑脊液细胞计数、蛋白测定、梅毒血清试验（常用VDRL试验）和胶体金试验，一般用于晚期病人且怀疑有神经梅毒者。
   
此外，对于皮肤黏膜损害也可应用活体组织病理切片检查，从病理上进行诊断。

在上述诊断梅毒的依据中，提及了梅毒血清试验。人检疫经常要问：梅毒血清试验阳性是否肯定为梅毒患者呢？下面就讲一下这个问题。 梅毒血清试验结果必须结合病史和临床症状进行分析，可以说梅毒血清试验阳性者有很大可能患有梅毒，但并不一定都是梅毒，因为血清试验可以出现假阳性，出现假阳性时可从两个方面来考虑。

1、技术性假阳性 如果抽血后由于标本保存不妥当，产生溶血或被细菌污染，或者是编号错误及实验室操作技术误差，均可造成假阳性。根据有关统计，这种假阳性可占25%。出现这种情况，只要重复试验，即可排除。

2、生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理情况发生变化而引起。其他疾病主要是感染性疾病或免疫功能紊乱等，甚至正常人在发生组织的一般损伤时也可出现微弱阳性。
如梅毒血清试验显示阳性，但患者没有病史和梅毒有关症状，则要认真分析检验的全过程有否出现过错误、患者有否出现生物学假阳性的疾病，还要考虑患者的生理状况，从而作出正确的判断。

梅毒病人是唯一的传染源。性接触传染占95%。主要通过性交由破损处传染，梅毒螺旋体大量存在于皮肤粘膜损害表面，也见于唾液、乳汁、精液、尿液中。未经治疗的病人在感染一年内最具传染性，随病期延长，传染性越来越小，病期超过4年者，通过性接触无传染性。亦可通过干燥的皮肤和完整的粘膜而侵入。少数可通过接吻、哺乳等密切接触而传染，但必须在接触部位附有梅毒螺旋体。由于梅毒螺旋体为厌氧性，体外不易生存，且对干燥极为敏感，故通过各种器物的间接传染，可能性极少。输血时如供血者为梅毒患者可传染于受血者。先天梅毒是患有梅毒的孕妇通过胎盘血行而传染给胎儿。一般在妊娠前四个月，由于滋养体的保护作用，梅毒螺旋体不能通过，故妊娠前四个月胎儿不被感染，以后滋养体萎缩，梅毒螺旋体即可通过胎盘进入胎儿体内传染胎儿。