琼脂糖凝胶怎么做大家都知道吗?可能大家对琼脂并不是很了解,下面就让康网小编就来告诉大家琼脂糖凝胶的做法介绍的相关信息,让大家更多了解一下琼脂糖凝胶怎么做吧。
琼脂糖凝胶介绍
琼脂糖凝胶agarose gel
外文名称:Sepharose 4B
中文名称:琼脂糖凝胶 4B
颗粒大小:45-165um
储藏温度:常温
商品名很多,常见的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。
琼脂糖 Agarose,缩写为AG,是琼脂中不带电荷的中性组成成份,也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖化学结构由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
琼脂糖凝胶做法介绍
把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。
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主料
红小豆琼脂
红糖适量
小豆凉糕的做法步骤
1. 红小豆浸泡一天后,多加些水煮至软烂,加红糖调味
2. 将煮好的红豆捞出,倒入滤网中,红豆汤待用
3. 用勺子将红豆捣烂过筛
4. 将琼脂浸泡在水中,直至泡软
5. 将红豆汤倒入过筛的红豆泥调匀,倒入小锅中小火加热,同时放入泡软的琼脂。待琼脂煮化,搅拌使红豆汤均匀即可离火
6. 稍晾凉后装入容器,放冰箱冷藏至凝固即可。食用时切成小块。
原理琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间,离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
操作流程准备干净的配胶板和电泳槽
注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。